人皮肤溶酶活性

人皮肤溶酶活性的测定

n -苯甲酰- l-酪氨酸乙酯为底物的测定(86)

所需的材料

1. Buffer; 0.6 M Tris-HCl ph8.0包含3.0 M NaCl, 25℃. 溶解53.3gm Tris-HCl, 31.8克Tris-base和175.3gm NaCl加900 ml H2O. 滴定至pH 8.25°C，加入水至1000 ml.

2. Substrate; 1.0 mM. 将31 mg n -苯甲酰- l-酪氨酸乙酯溶于100 ml 30% (v/v)乙醇水溶液中.

3. 酶解. 准备0.1毫克每毫升在0.05 M NaOAc H.0. 在冰浴中保存在5°C.

过程

1. 将分光光度计调至256nm，细胞温度调至25°C.

2. 吸管1.5毫升缓冲液和1.5ml底物注入细胞. 混合，在细胞中平衡至25°C.

3. Add 10 μl enzyme solution; mix and record increase in A256 nm/min for 2-4 minutes.

比活度计算

Vol = 3.1毫升= 256海里T = 25°C光路我= 1厘米,1毫米酪氨酸= 0.964

单位  =  ∆A₂₅₆/min x (3.01 ml)
mg             0.964 x 0.001 mg